試劑與材料

大腸埃希菌 標(biāo) 準(zhǔn) 菌 株 （ATCC25922）；營(yíng) 養(yǎng) 瓊 脂（170103）；乳糖蛋白胨培養(yǎng)基（170517）；滅菌生理鹽水（201702140）。

 方法

1 .菌種的活化

將凍藏的大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌株磁珠用接種環(huán)取出， 用接種環(huán)把大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌株磁珠在營(yíng)養(yǎng)瓊脂 平 板 上 分 區(qū) 劃 線 。 把 劃 線 的 營(yíng) 養(yǎng) 瓊 脂 平 板 放 入（37±0.5）°C培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24 h

2. 菌液的制備以及菌落的計(jì)數(shù)

挑取菌落到 1 mL 滅菌磷酸緩沖液中，制成 1 麥氏比濁度的菌懸液。 從菌懸液中吸取 0.5~4.5 mL 滅菌生理鹽水中，制成 1∶10 的稀釋液，然后逐一 10 倍稀釋到 10 -7 麥?zhǔn)媳葷岫?/span>。 取 10 -7 麥?zhǔn)媳葷岫鹊南♂?/span>液采用多管發(fā)酵法完成實(shí)驗(yàn)。 取樣量分別為 1 mL、0.1 mL、0.01 mL。 每次試驗(yàn)做 3 份多管發(fā)酵法試驗(yàn)，共做 7 次。 每次試驗(yàn)的 3 份多管發(fā)酵法試驗(yàn)分別放入 隔 水 式 培 養(yǎng) 箱 、 電 熱 培 養(yǎng) 箱 、 生 化 培 養(yǎng) 箱 中 ，44.5°C培養(yǎng) 24 h。 同時(shí)吸取 10 -7 麥?zhǔn)媳葷岫鹊南♂?/span>液 2 mL，分別于 2 個(gè)平皿各 1 mL，每個(gè)平皿傾注約15 mL 已融化并冷卻到約 45°C的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并立即旋搖平皿，使稀釋液與培養(yǎng)基充分混勻，待冷卻凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，使底面向上，置于 44.5°C培養(yǎng)內(nèi)培養(yǎng) 48 h，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，共做 7 次。

3.溫度的記錄

從早上開(kāi)始上班時(shí)記錄不同培養(yǎng)箱的的溫度，每隔 1 h 記錄一次。

 精密度分析

種培養(yǎng)箱的各個(gè)時(shí)間段的溫度見(jiàn)表 1 和圖 1；在 7 次 試 驗(yàn) 中 ， 用 得 到 的 大 腸 埃 希 菌 最 大 或 然 數(shù)（MPN 數(shù)）做精密度分析。 結(jié)果見(jiàn)表 2。 從表 1、表 2和圖 1 來(lái)看，隔水式培養(yǎng)箱的溫度波動(dòng)范圍小，結(jié)果
值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為 11.4%，相對(duì)穩(wěn)定；電熱式 培 養(yǎng) 的 溫 度 波 動(dòng) 范 圍 大 ， 結(jié) 果 值 的 RSD 為24.3%，相 對(duì) 較 大 ；生 化 培 養(yǎng) 箱 的 溫 度 波 動(dòng) 范 圍 大 ，結(jié)果值的 RSD 為 15.7%，相對(duì)較大。

t 檢驗(yàn)分析

在 7 次試驗(yàn)中，用得到的大腸埃希菌 MPN 值與平皿的菌落數(shù)相比做 t 檢驗(yàn)分析。 結(jié)果見(jiàn)表 3。 從表3 可知，隔水式培養(yǎng)箱培養(yǎng)大腸埃希菌的 MPN 值與平皿菌落總數(shù)相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.807，P＞0.05）（t 為樣品平均數(shù)與總體平均數(shù)的離差統(tǒng)計(jì)量；P 為假設(shè)兩組比較無(wú)差異的概率）； 電熱式培養(yǎng)箱和生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)大腸埃希菌的 MPN 值與平皿菌 落 總 數(shù) 相 比 較 ， 差 異 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義 （t=2.700、5.004，P＜0.05）。